PCR檢測(cè)試劑盒是酶免疫測(cè)定技能中應(yīng)用較廣的技能。其基本辦法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體外表，使酶符號(hào)的抗原抗體反響在固相外表進(jìn)行，用洗刷法將液相中的游離成分洗除。常用ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn),法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測(cè)大分子抗原，后者用于測(cè)定特異抗體。
此種酶符號(hào)抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反響。因而，可通過底物的顏色反響來判定有無相應(yīng)的免疫反響，顏色反響的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。
此種顯色反響可通過酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定，這樣就將酶化學(xué)反響的敏感性和抗原抗體反響的特異性結(jié)合起來，使酶聯(lián)免疫試劑盒辦法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)辦法。
PCR檢測(cè)試劑盒操作步驟
1．確認(rèn)本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。
2．將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml順次參加一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對(duì)照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔參加。
3．酶標(biāo)板加上蓋，37℃反響90分鐘。
4．反響后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對(duì)著吸水紙拍幾下。洗刷2次。
5．將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml順次參加。37℃反響60分鐘。
6．0.01M TBS或0.01M PBS洗刷3次，每次浸泡1分鐘左右。
7．將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml順次參加。37℃反響30分鐘。
8．0.01M TBS或0.01M PBS洗刷5次，每次浸泡1-2分鐘左右。
9．按每孔0.1ml順次參加TMB顯色工作液，37℃避光反響，反響過程中，要經(jīng)常的觀察，當(dāng)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有顯著的梯度藍(lán)色，后3-4孔差別不顯著時(shí)，即可參加TMB停止液0.1ml/孔。（顯色反響不要超過30分鐘）。
10．用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定O.D.值。
11．依據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來核算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實(shí)踐濃度應(yīng)該×N。
我司自開展以來一直堅(jiān)持誠(chéng)信為本的理念，公司在劇烈的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)中開展起來，全面提高服務(wù)功能，以誠(chéng)信服務(wù)，服務(wù)，促進(jìn)企業(yè)的經(jīng)營(yíng)開展。我們具有杰出的專業(yè)背景與豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，為各類產(chǎn)品而不斷努力著！
在線咨詢