人靜脈內(nèi)皮細胞 (HUV-EC)
細胞介紹：
該細胞來源于人靜脈內(nèi)皮，可在半固體培養(yǎng)基中形成克隆，在免疫抑制小鼠中不能形成腫瘤。
 
細胞接收后的處理：
1.收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2.請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37°C培養(yǎng)約 2-3h。
3.棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4.如果細胞長滿80%-90%請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用本公司附帶的*
培養(yǎng)基。
 
細胞培養(yǎng)步驟：
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1.準備 F-12K 培養(yǎng)基(F-12K:SIGMA,添加 0.1 mg/ml 肝素;0.03-0.05 mg/ml內(nèi)皮細胞生長因子)，90%;胎牛血清，10%。

2.培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
 
2)細胞處理：
復蘇細胞：將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
 
人靜脈內(nèi)皮細胞 (HUV-EC)對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 
3)細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
 
下面T25瓶為例；
細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。lOOOrpm離心分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 
注意事項：
收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯(lián)。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 
細胞特性：
1)來源：人靜脈內(nèi)皮
2)形態(tài)：內(nèi)皮細胞
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
人靜脈內(nèi)皮細胞 (HUV-EC)運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1)干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2)存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們電聯(lián)。

細胞用途：僅供使用。